Preparazione di terreni nutritizi agarizzati per la coltura di isolati fungini

Terreni colturali.pdf

Agar Amido di Patate (AM)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

MnSO4 5H2O	0.05g
NaCl	0.1g
FeSO4 7H2O	0.01g
CoCL2 6H2O	0.01g
ZnSO4 7H2O	0.01g
CuSO4 5H2O	0.001g
AlK(SO4)2	0.001g
H3BO3	0.001g
NaMoO4 2H2O	0.001g

Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Amido di patate	18 g
Ammonio tartrato	2 g
KH2PO4	2 g
MgSO47H2O	0.5 g
CaCl2 2H2O	0.1 g
Agar	18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Agar Estratto di Malto (MEA)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio	20 g
Estratto di malto	20 g
Peptone micologico da caseina	2 g
Agar	20 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Agar Estratto di Malto addizionato di antibiotici (MEA Ab)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 20 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
Agar 20 g
Cloramfenicolo 0.05 g
Streptomicina 0.015 g

Unire tutti i reagenti, tranne gli antibiotici, in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min. Lasciare raffreddare e aggiungere in ambiente sterile la soluzione di antibiotici precedentemente sterilizzata tramite filtrazione (20 μm).

Agar Estratto di Malto per alofili (MEA NaCl 15%)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 20 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
Agar 20 g
NaCl 150 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Agar Estratto di Malto cicloesimmide (MEACX)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio monoidrato 20 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
Agar 20 g

Sciogliere in 3 ml di acetone il contenuto di un flacone di Dermasel Selective Supplement (OXOID cat. n. SR075E). Unire tutti i reagenti, contenuto del falcone di Dermasel compreso, in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Agar segatura

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Agar 12 g
Segatura finemente macinata (di latifoglia o di conifera opp. mista, in relazione alle caratteristiche del fungo da coltivare) 10 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Blakeslee Malt Extract Autolysate agar (BMEA)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Estratto di malto 30 g
Peptone micologico da caseina 1 g
Glucosio 20 g
CuSO₄ 5H₂O 0.005 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
Agar 20 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Bold’s Basal Medium (BBM)

Pesare le seguenti soluzioni stock in acqua demineralizzata, pesando i singoli reagenti utilizzando una bilancia analitica:

a) NaNO₃ 0.2 g in 80 ml
b) CaCl₂ 0.1 g in 40 ml
c) MgSO₄ 7H₂O 0.3 g in 40 ml
d) K₂HPO₄ 0.3 g in 40 ml
e) KH₂PO₄ 0.7 g in 40 ml
f) NaCl 0.1 g in 40 ml
g) H₃BO 1.142 g in 100 ml
h) FeSO₄ 7H₂O 0.498 g
+ ZnSO₄ 7H₂O 0.882 g
+ MnCl₂ 4H₂O 0.144 g in 100 ml
i) MoO₃ 0.071 g
+ CuSO₄ 5 H₂O 0.157 g
+ Co(NO₃)₂ 6 H₂O 0.049 g in 100 ml
l) EDTA 5 g
+ KOH 3.100 g in 100 ml

Prelevare le seguenti aliquote di ciascuna soluzione stock:
a 20 ml,
b, c, d, e, f 10 ml
g, h, i, l 1 ml

Aggiungere 15 g di Agar e portare a volume di 1 L con acqua demineralizzata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Creatine Sucrose Agar (CREA)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Creatina 3 g
Saccarosio 30 g
KH₂PO₄ 3 H₂O 1.6 g
MgSO₄ 7 H₂O 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O 0.005 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
Rosso di Bromocresolo 0.05 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.
Avvenuta la sterilizzazione controllare con l’ausilio di cartine tornasole il pH del terreno nutritizio.
Aggiustare il pH a 8.00.

Czapek’s (CZ)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

NaNO₃ 3 g
KH₂PO₄ 1 g
MgSO₄ 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
Saccarosio 30 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Czapek’s 70 % per alofili (CZ 70%)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

NaNO₃ 3 g
KH₂PO₄ 1 g
MgSO₄ 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
Saccarosio 700 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Czapek’s 40 % per alofili (CZ 40%)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

NaNO₃ 3 g
KH₂PO₄ 1 g
MgSO₄ 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
Saccarosio 400 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Czapek’s 20 % per alofili (CZ 20%)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

NaNO3 3 g
KH2PO4 1 g
MgSO4 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO4 7H2O 0.01 g
Saccarosio 200 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Czapek Yeast Autolisate (CYA) Agar

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

NaNO₃ 3 g
KH₂PO₄ 3 H₂O 1.3 g
MgSO₄ 7 H₂O 0.5 g
KCl 0.5 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O 0.005 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
Estrattodi lievito 5 g
Saccarosio 30 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Dichloran 18% Glycerol Agar (DG18)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Dichloran-Glycerol (DG18) Agar Base (Oxoid cat n. CM 729) 15.75 g

Porre i 15,75 g in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 500 ml di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Aggiungere quindi 110 g di Glicerolo (puro per analisi). Ricostituire asetticamente il contenuto di un flacone di Chloramphenicol Selective Supplement (Oxoid cat n. SR0078E) con 3 ml di etanolo e agitare fino a completa dissoluzione. Asetticamente aggiungere quindi il contenuto del falcone alla bottiglia contenente il DG 18 e il glicerolo. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol Agar (DRBC)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Dichloran Rose Bengal Agar 15.75 g (Fluka cat. n. 17147)

Porre i 15,75 g in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 500 ml di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea.
Ricostituire asetticamente il contenuto di un flacone di Chloramphenicol Selective Supplement (Oxoid cat n. SR0078E) con 3 ml di etanolo e agitare fino a completa dissoluzione. Asetticamente aggiungere quindi il contenuto del falcone alla bottiglia contenente il DRBC.
Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

EQ

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05g
NaCl 0.1g
FeSO₄ 7H₂O 0.01g
CoCL₂ 6H₂O 0.01g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01g
CuSO₄ 5H₂O
AlK(SO₄)₂ 0.001g
H₃BO₃ 0.001g
NaMoO₄ 2H₂O 0.001g

Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 20 g
Ammonio tartrato 2 g
KH₂PO₄ 2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

GN1

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05 g
NaCl 0.1 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CoCL₂ 6H₂O 0.01 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O 0.001 g
AlK(SO₄)₂ 0.001 g
H₃BO₃ 0.001 g
NaMoO₄ 2H₂O 0.001 g

Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 10 g
Ammonio Tartrato 0.1 g
KH₂PO₄ 2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

GN 0.1

Pesare, utilizzando una bilancia analitica, i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05 g
NaCl 0.1 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CoCL₂ 6H₂O 0.01 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O AlK(SO₄)₂ 0.001 g
H₃BO₃0.001g
NaMoO₄ 2H2O 0.001 g

Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 10 g
Ammonio Tartrato 0.1 g
KH₂PO₄ 2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

GN4

Pesare, utilizzando una bilancia analitica, i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05 g
NaCl 0.1 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CoCL₂ 6H₂O 0.01 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O 0.001 g
AlK(SO₄)₂ 0.001 g
H₃BO₃ 0.001 g
NaMoO₄ 2H₂O 0.001 g

Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 10 g
Ammonio Tartrato 4 g
KH₂PO₄2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

GN 0.44

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05 g
NaCl 0.1g
FeSO₄ 7H₂O 0.01g
CoCL₂ 6H₂O 0.01g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01g
CuSO₄ 5H₂O 0.001g
AlK(SO₄)₂ 0.001g
H₃BO₃ 0.001g
NaMoO₄ 2H₂O 0.001g


Portare al volume finale di 100 ml con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.
Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 10 g
Ammonio Tartrato 0.44 g
KH₂PO₄ 2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

HAGEM

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

KH₂PO₄ 0.5 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
NH₄Cl 0.5 g
FeCl₃ 6H₂O 0.5 ml di una soluzione 1%
Glucosio 5 g
Estratto di malto 5 g
Agar 15 g
Tiamina 0.05 g
Biotina 0.001 g

Unire tutti i reagenti, tranne gli antibiotici, in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata.
Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico,
fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min. Lasciare raffreddare e aggiungere in ambiente sterile la soluzione di antibiotici precedentemente sterilizzata tramite filtrazione (20 μm).

HAGEM addizionato di antibiotici (HAGEM Ab)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

KH₂PO₄ 0.5 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
NH₄Cl 0.5 g
FeCl₃ 6H₂O 0.5 ml di una soluzione all’1%
Glucosio 5 g
Estratto di malto 5g
Agar 15 g
Tiamina 0.05 g
Biotina 0.001 g
Cloramfenicolo 0.05 g
Streptomicina 0.015 g

Unire tutti i reagenti, tranne gli antibiotici, in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min. Lasciare raffreddare e aggiungere la soluzione di antibiotici precedentemente sterilizzata tramite filtrazione (20 μm).

M102 per endofiti delle Poaceae

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Saccarosio 30 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
KH₂PO₄ 1 g
MgSO₄ 0.5 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea e quindi portare il pH a 6.00 utilizzando
NaOH 10 N. Aggiungere 20 g di Agar miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.
Referenze bibliografiche: C.W. Bacon Appl.Envir.Microb. 54:2615-2618 1998.

M102 per endofiti delle Poaceae addizionato di antibiotici

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Saccarosio 30 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
KH₂PO₄ 1 g
MgSO₄ 0.5 g

Unire tutti i reagenti, tranne gli antibiotici e l'Agar, in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea e quindi portare il pH a 6.00 utilizzando NaOH 10 N. Aggiungere 20 g di Agar miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min. Lasciar raffreddare fino a 50 °C e aggiungere in ambiente sterile la soluzione di antibiotici (cloramfenicolo 0.05 g) precedentemente sterilizzata tramite filtrazione (20 µm).

M20

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 20 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
Saccarosio 200 g
Agar 15g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea.
Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

M40

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 20 g
Estratto di malto 20 g
Peptone micologico da caseina 2 g
Saccarosio 400 g
Agar 15g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea.
Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

M40Y

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Estratto di malto 20 g
Estratto di lievito 5 g
Saccarosio 400 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea.
Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

MPGT

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Estratto di malto 30 g
Peptone micologico da caseina 5 g
Glucosio 2.5 g
Trealosio 20 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Oast Agar (OA)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Fiocchi di avena 30 g
Agar 15 g

Fare bollire, a fuoco lento, utilizzando una pentola e un becco bunsen, i fiocchi di avena in 1 L di H₂O distillata per 2 ore. Trascorse le 2 ore filtrare il tutto utilizzando un colino da cucina.
Riportare al volume di 1 L e quindi aggiungere 15 g di Agar. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

PIAM

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Estratto di malto vitaminizzato P.I.A.M. 20 g (Vecchi e PIAM)
Petone 2 g
Glucosio 20 g
KH₂PO₄ 0.2 g
FeCl₃ tracce
Agar 16 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

PIAM glicerolo (PIAM Gly)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Estratto di malto vitaminizzato P.I.A.M. 20 g (Vecchi e PIAM)
Petone 2 g
Glucosio 20 g
KH₂PO₄ 0.2 g
FeCl₃ tracce
Agar 16 g
Glicerolo 50 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Phytone Yeast Extract (PYE)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Phytone 20 g
Glucosio 40 g
Estratto di lievito 5 g
Agar 20 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al
raggiungimento di una soluzione omogenea Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Potato Glucose Agar (PGA)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Potato Glucose Agar (Fluka cat n. 70139) 39 g

Porre i 39 g in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

Sabouraud

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Peptone micologico da caseina 10 g
Glucosio 40 g
Agar 15 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

SINT

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

MnSO₄ 5H₂O 0.05 g
NaCl 0.1 g
FeSO₄ 7H₂O 0.01 g
CoCL₂ 6H₂O 0.01 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
CuSO₄ 5H₂O 0.001 g
AlK(SO₄)₂ 0.001 g
H₃BO₃ 0.001 g
NaMoO₄ 2H₂O 0.001 g

Portare al volume finale di 100 mL con acqua distillata per preparare una soluzione stock di micro elementi.

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Glucosio 40 g
Ammonio Tartrato 2 g
KH₂PO₄ 2 g
MgSO₄ 7H₂O 0.5 g
CaCl₂ 2H₂O 0.1 g
Agar 18 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere quindi 10 ml di una soluzione di micro elementi. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.

V8

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Minestrone congelato 300 g
CaCO₃ 2 g

Fare bollire il minestrone in 1 L di H₂O distillata per 20 min a fuoco lento, utilizzando una pentola e un becco bunsen. Filtrare il minestrone con un colino da cucina. Riportare al volume di 1 L e quindi aggiungere 2 g di CaCO₃ e aggiustare il pH a 7-7.3. Aggiungere 18 g di Agar e sterilizzare a 110 °C in autoclave per 30 min.

Yeast Extract Sucrose (YES)

Pesare utilizzando una bilancia analitica i seguenti reagenti:

Saccarosio 15 g
MgSO₄ 7 H₂O 0.5 g
CuSO₄ 5H₂O 0.005 g
ZnSO₄ 7H₂O 0.01 g
Agar 20 g

Unire tutti i reagenti in una bottiglia in vetro pirex da un litro e aggiungere 1 L di acqua distillata. Aggiungere un’ancoretta magnetica e miscelare bene con l’ausilio di un agitatore magnetico, fino al raggiungimento di una soluzione omogenea. Sterilizzare a 121 °C in autoclave per 20 min.